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讲真RCR 实验的这些坑你都躺过吗?

来源:未知 编辑:admin 时间:2018-09-29

  首先是待测样品显示阳性,即便是 DEPC-H2O,重复 3 次也显示阳性;其次,即使在待测样品(细胞上清,含有病毒)中加入 DNase 和 RNase 使其充分酶解消化,结果仍为阳性;最后,从阳参来看,引物性不是很好。

  按照 中给出的 protocol:第一天六孔板铺板 10 万细胞,第二用 GALV 病毒感染 2 h 后换液,然后每天换液继续培养,直到待测组 (未使用病毒感染,只有 PG4 细胞组) 全部长满,www.88pt88.com!此时阳性组 (GALV 病毒感染 2 h 组) 会出现很多空斑,即细胞不能长满。

  现在问题来了,一直听同事说 PG4 细胞有点奇怪,它不像 PG13 细胞,293T 细胞和 Hela 细胞等在培养皿里是均匀平铺的,而是许多细胞聚集在一起成为一个个细胞群,这样细胞群和细胞群之间本来就有很大的空洞,那怎么来证明这些空洞是因为 GALV 病毒导致的呢?

  我停下实验,仔细思索,决定单独拿出两皿细胞不再传代一直培养,因为先前我就是怀疑培养时间--3 天--有点短,所以我每天给这两盘细胞换液观察,等到第 6 天,奇迹出现了,细胞真的长满了!!!

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